Solarbio ELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗大鼠 TNF-α單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上；分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本，標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的大鼠 TNF-α?xí)c酶標(biāo)板上的包被抗體充分結(jié)合；洗板后加入生物素化抗大鼠 TNF-α抗體，該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的大鼠 TNF-α發(fā)生特異性結(jié)合；洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強(qiáng)度的非共價結(jié)合；洗板后加入顯色劑底物TMB，若反應(yīng)孔中樣品存在不同濃度的大鼠 TNF-α，則HRP會使無色TMB變成不同深淺（正相關(guān)）的藍(lán)色物質(zhì)，加入終止液后反應(yīng)孔會變成黃色；最后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定反應(yīng)孔樣品吸光度（OD），樣本中的大鼠 TNF-α濃度與OD成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計(jì)算出樣本中大鼠 TNF-α的濃度。